L'électrophorèse sur gel est une méthode utilisée dans les laboratoires pour mesurer et trier les brins d'ADN. Cela est nécessaire car l'ADN dans des conditions normales est trop petit pour être manipulé, même lorsqu'il est vu avec la plupart des microscopes. L'électrophorèse sur gel est une procédure relativement simple, et la même technique de base peut être utilisée pour séparer les protéines individuelles.

La matrice de gel

Pour commencer l'électrophorèse sur gel, vous devez d'abord créer le gel . Typiquement, les gels sont faits en fines feuilles en utilisant une substance appelée agarose. L'agarose en poudre est placé dans un ballon, suivi d'une solution d'eau salée appelée un tampon. Ce mélange d'agarose et de tampon est chauffé jusqu'à ce que les deux substances fondent ensemble, puis versées dans un moule de formage. Un dispositif appelé peigne est ensuite placé à une extrémité du moule avant que le gel ne refroidisse. Lorsque le gel est refroidi, le peigne est retiré, laissant de petites fentes qui serviront à retenir les échantillons d'ADN.

Une caractéristique particulière du mélange d'agarose refroidi (appelé matrice de gel) provient du fait qu'il est créé avec de l'eau salée. Lorsqu'elle est électrifiée, la matrice devient conductrice, ce qui permet à l'électricité de circuler sur sa longueur. Une autre propriété particulière de la matrice de gel est la présence de trous microscopiques réguliers. Ces trous permettront à des brins d'ADN de traverser la matrice de gel et de faciliter le processus de tri.

La chambre d'électrophorèse

Votre prochaine étape consiste à créer une chambre d'électrophorèse. Ceci est une petite boîte rectangulaire, câblée avec une connexion électrique positive et négative à chaque extrémité. Les chambres sont généralement peu profondes, assez petites pour tenir sur une table et construites à partir de matériaux transparents comme le plexiglas.

Une solution d'eau salée est versée dans la chambre d'électrophorèse et la matrice de gel est légèrement immergée dans cette solution . L'eau salée sert à deux fins: aider le flux d'électricité et maintenir la matrice de gel humide. Puisque l'ADN est propulsé par une charge négative, placez votre matrice de sorte que vos échantillons soient situés à côté de votre connexion électrique négative.

Préparer l'ADN

Les échantillons d'ADN sont ensuite préparés. Puisque l'ADN en solution est presque impossible à voir, un colorant appelé un tampon de chargement est ajouté à chaque échantillon individuel. Cet agent épaissit également la solution d'ADN, la rendant moins liquide et plus facile à travailler. À l'aide d'une pipette, transférer un échantillon de solution d'ADN dans chaque fente alternée dans la matrice de gel. Dans la fente vide entre chaque échantillon, placez une solution d'ADN dont vous connaissez déjà la longueur (appelée norme d'ADN) pour le contrôle et la comparaison des expériences.

Allumez la puissance

Maintenant, allumez votre chambre d'électrophorèse. Sous un pouvoir négatif, vos échantillons d'ADN seront forcés sur toute la longueur de la chambre. De petits brins d'ADN se déplaceront plus rapidement à travers la matrice de gel, et dans un court laps de temps, ils se sépareront des brins plus longs et plus lents. Le colorant dans l'agent colorant vous permet de suivre la trace de l'ADN. Vous ne pourrez pas voir des brins d'ADN individuels, mais des brins de même longueur s'aggloméreront ensemble.

Étapes finales

Quand l'ADN est trié, la matrice est retirée de l'électrophorèse chambre. L'ADN est ensuite coloré pour faciliter la mesure et l'examen.