Les scientifiques utilisent des dilutions en série (une série de dilutions 1:10) pour calculer la densité de population des cultures bactériennes. Lorsqu'une goutte de culture contenant un petit nombre de bactéries est plaquée et incubée, chaque cellule sera théoriquement suffisamment éloignée des autres cellules pour former sa propre colonie. (En réalité, certaines colonies peuvent être des descendants de deux cellules voisines, mais cela est rare dans les cultures diluées, et donc le nombre de colonies est une très bonne estimation du nombre de cellules initialement transférées à la plaque.) Parce que la densité de population est inconnue, une variété de dilutions doit être utilisée pour finir avec une plaque avec un nombre approprié de colonies.

Dilutions en série

Étiqueter les six tubes à essai (contenant chacun 9 mL de croissance 1). Etiquetez les six plaques de gélose de 1 à 6. Utilisez un pipeteur et des pointes de pipette stériles de 1 millilitre (mL) pour transférer 1 mL de culture bactérienne dans le tube 1.

Bien mélanger et transférer 1 mL du tube 1 dans le tube 2 à l'aide d'une pipette et d'embouts stériles de 1 mL.

Répétez l'étape 2 pour les tubes restants, en transférant chaque fois 1 mL du tube le plus récemment utilisé dans le tube suivant.

Utilisez une pipette et des pointes stériles de 0,1 mL pour transférer 0,1 mL du tube 1 dans une boîte de gélose. Flamme une tige de verre en forme de L et l'utiliser pour répartir la goutte uniformément autour de la plaque. Incuber la plaque pendant 48 heures à une température appropriée pour les bactéries utilisées. Différents types de bactéries ont des températures de croissance optimales différentes. Si vous ne pouvez pas trouver la température de croissance optimale en utilisant le matériau de référence, essayez d'incuber les plaques à 25 et 37 degrés.

Répétez l'étape 4 en transférant chaque fois le liquide d'un tube à essai différent sur la plaque correspondante. h2> Calculs de population

Observez les six plaques et choisissez celle avec 30 à 200 colonies isolées.

Multipliez le nombre de colonies sur la plaque par 10 pour calculer le nombre de cellules par ml de culture du tube de dilution utilisé.

Multiplier le nombre de l'étape 2 par 10 ^ (numéro de plaque) pour calculer le nombre de cellules par ml de culture originale. La valeur de 10 ^ (numéro de plaque) est le facteur de dilution de la culture utilisée pour inoculer cette plaque.

Astuce

Inclure tous les nutriments nécessaires dans les plaques de gélose. Les bactéries auxotrophes nécessitent certains acides aminés en plus des ingrédients de base des milieux. Différents auxotrophes ont des besoins nutritionnels différents. Consultez le matériel de référence pour savoir quels acides aminés, le cas échéant, vos bactéries ont besoin.

Attendez une seconde entre enflammer la tige de verre et l'utiliser, pour ne pas brûler les bactéries.

Avertissement

Toujours porter des gants de laboratoire lors de la manipulation des bactéries.