1. Modèle ADN:
* Fonction: La séquence d'ADN que vous souhaitez amplifier. Il sert de plan pour l'enzyme de polymérase à copier.
2. Amorces:
* Fonction: Des séquences d'ADN à brin courtes et brinales (généralement 18-30 nucléotides) qui sont complémentaires de régions spécifiques sur l'ADN de la matrice. Ils se lient à l'ADN de la matrice et fournissent un point de départ pour l'ADN polymérase.
3. ADN polymérase:
* Fonction: Une enzyme qui synthétise de nouveaux brins d'ADN à l'aide de l'ADN et des amorces de matrice. Il ajoute des nucléotides à l'extrémité 3 'de l'amorce dans une direction de 5' à 3 '.
4. Désoxynucléoside triphosphates (DNTP):
* Fonction: Blocs constitutifs de l'ADN. Ils se composent de quatre types:DATP, DCTP, DGTP et DTTP, qui représentent les quatre bases (adénine, cytosine, guanine et thymine). L'ADN polymérase les utilise pour assembler les nouveaux brins d'ADN.
5. Solution tampon:
* Fonction: Contient des sels et des ions qui maintiennent le pH et la résistance ioniques appropriés pour une activité optimale de l'ADN polymérase.
6. Chlorure de magnésium (MGCL2):
* Fonction: Un cofacteur pour l'ADN polymérase, requis pour son activité catalytique. Il aide également à stabiliser la structure de l'ADN.
7. Eau:
* Fonction: Solvant pour la réaction et fournit un milieu pour les composants d'interagir.
Voici un bref résumé du processus de PCR:
1. dénaturation: Le mélange réactionnel est chauffé à 94-98 ° C, ce qui sépare l'ADN de matrice à double brin en brins simples.
2. recuit: La température est abaissée à 50-65 ° C, permettant aux amorces de se lier à leurs séquences complémentaires sur l'ADN de matrice simple brin.
3. Extension: La température est augmentée à 72 ° C, la température optimale pour l'ADN polymérase. La polymérase étend les amorces, ajoutant des DNTP pour créer de nouveaux brins d'ADN.
Ces trois étapes sont répétées pour plusieurs cycles, entraînant une amplification exponentielle de la séquence d'ADN cible.
