1. Préparation de la colonne échangeuse d'ions :
- Une colonne échangeuse d'ions est remplie d'une résine contenant des groupes chargés qui peuvent attirer et se lier à des molécules (ions) de charges opposées.
- La résine peut être soit chargée positivement (résine échangeuse de cations), soit chargée négativement (résine échangeuse d'anions).
2. Exemple d'application :
- Le mélange ou l'échantillon d'acides aminés est appliqué à la colonne échangeuse d'ions.
3. Solutions tampon :
- Différentes solutions tampons avec différents pH et concentrations de sel traversent la colonne.
4. Interaction électrostatique :
- Les acides aminés ont des charges nettes différentes à différentes valeurs de pH en raison de la présence de divers groupes fonctionnels chargés.
- Lorsque les solutions tampons traversent la colonne, les acides aminés interagissent avec les groupes chargés de la résine en fonction de leurs charges nettes.
- Les acides aminés chargés positivement (cations) se lieront à la résine chargée négativement dans la chromatographie échangeuse de cations, tandis que les acides aminés chargés négativement (anions) se lieront à la résine chargée positivement dans la chromatographie échangeuse d'anions.
5. Élution :
- En modifiant le pH ou la concentration en sel des solutions tampons, la force des interactions électrostatiques entre les acides aminés et la résine peut être modifiée.
- À mesure que les conditions du tampon changent, différents acides aminés seront élués (lavés) de la colonne à différents moments.
- Ce processus d'élution sépare les acides aminés en fonction de leurs différences de charge.
6. Détection et collecte :
- Au fur et à mesure que les acides aminés s'éluent de la colonne, ils sont détectés à l'aide d'un détecteur, tel qu'un détecteur ultraviolet-visible (UV-Vis).
- Les acides aminés peuvent ensuite être collectés sous forme de fractions séparées.
7. Fractionnement et analyse :
- Les fractions collectées sont ensuite analysées et caractérisées à l'aide de techniques telles que la chromatographie sur couche mince (CCM) ou l'électrophorèse pour confirmer l'identité des acides aminés séparés.
La chromatographie échangeuse d'ions est largement utilisée pour séparer et purifier les acides aminés, les protéines et autres molécules chargées. Il permet un contrôle précis de la séparation des composés en fonction de leurs propriétés de charge spécifiques.
