La réaction entre le thiosulfate et l'iode peut être représentée par l'équation suivante :
2S2O3^2- + I2 → S4O6^2- + 2I^-
Au point final du titrage, tout le thiosulfate a réagi avec l’iode, il n’y aura donc plus d’ions S2O3^2- dans la solution. Cela signifie que tout iode supplémentaire ajouté ne réagira pas avec le thiosulfate et restera en solution sous forme de molécules I2. Ces molécules I2 absorberont la lumière dans le spectre visible, donnant à la solution une couleur bleue.
La formation d’ions triiodure peut être représentée par l’équation suivante :
I2 + I- → I3^-
Les ions I3- sont également responsables de la couleur bleue de la solution.