La chromatographie liquide à haute performance (CLHP) est une technique de laboratoire utilisée pour séparer et identifier les composés. C'est un type de chromatographie sur colonne qui repose sur différentes polarités de composés dans une solution afin de les séparer. La CLHP diffère de la chromatographie sur colonne standard car elle utilise la pression pour forcer la solution à travers la colonne plus rapidement, et produit donc des résultats plus rapides, et parfois plus précis. Le but est de séparer les composés dans la colonne et de les faire sortir séparément.
Coelution
En raison de la vitesse de la CLHP et de la dépendance aux différentes polarités des composés, deux composés de structure et de polarités similaires peut quitter l'appareil de chromatographie en même temps ou presque en même temps. C'est ce qu'on appelle la coelution. La coélution permet de déterminer exactement quelle partie du mélange a été éluée à quel point. La CLHP utilise typiquement une colonne de verre remplie de billes faites de différents matériaux. Les mélanges qui sont forcés à travers la colonne ont des produits chimiques qui se lient avec différentes forces aux perles. La force de la liaison, qui dépend de la similarité de la polarité, détermine la durée pendant laquelle le produit chimique va se lier à la perle avant d'être libéré. Certains composés se lient si fortement qu'ils ne sont essentiellement jamais libérés des billes dans la colonne et ne sont jamais mesurés dans la solution sortant de la colonne. Coût Les techniques de séparation de laboratoire typiques impliquent le développement d'un test, ou méthode de séparation, puis mise en œuvre de ce test pour séparer les composés individuels d'une solution. Cependant, cela entraîne généralement de multiples solutions qui doivent également subir des procédures, ce qui entraîne une augmentation exponentielle de la complexité. Bien que la CLHP puisse souvent simplifier et accélérer ce processus, le coût de développement d'un appareil HPLC peut devenir énorme. Le développement d'un appareil HPLC, bien que beaucoup plus efficace, est beaucoup plus coûteux que le développement d'autres tests pour séparer les composés. Cela ne rend pas financièrement viable pour de nombreux petits laboratoires privés. Complexité La HPLC n'est pas seulement utilisée pour séparer des composés simples, elle est également utilisée pour isoler des protéines spécifiques d'un mélange cellulaire. Dans ce cas, les billes de la colonne sont généralement recouvertes d'un anticorps spécifique de la protéine que vous devez collecter. Les protéines se lient aux anticorps et la solution restante est passée à travers la colonne, puis les protéines sont libérées en utilisant une autre solution et recueillies. Cela nécessite un technicien hautement qualifié pour surveiller la colonne à tout moment et s'assurer que le processus fonctionne exactement comme prévu.
