Les spectrophotomètres sont des outils essentiels pour mesurer l'absorbance et la transmittance de la lumière à travers un échantillon, fournissant des informations précieuses dans des domaines comme la chimie, la biologie et la médecine. L'étalonnage précis est crucial pour assurer des mesures fiables et précises. Voici une ventilation du processus:
1. Calibration de longueur d'onde:
* en utilisant une norme: C'est la méthode la plus courante. Une norme connue avec un pic d'absorption spécifique à une longueur d'onde connue (par exemple, un filtre à oxyde de l'Holmium, un filtre didymium) est utilisée.
* Procédure:
* La norme est placée dans le chemin du faisceau du spectrophotomètre.
* La longueur d'onde de l'instrument est ajustée jusqu'à ce que l'absorbance maximale soit enregistrée.
* L'instrument est ensuite calibré à la longueur d'onde connue du pic de la norme.
* Importance: Assure que l'instrument identifie avec précision les longueurs d'onde de la lumière qu'il utilise pour la mesure.
2. Calibration d'absorbance / transmittance:
* à l'aide d'un blanc: Un blanc est une solution qui contient tous les composants de l'échantillon à l'exception de l'analyte mesuré.
* Procédure:
* Le blanc est placé dans le chemin du faisceau du spectrophotomètre.
* L'instrument est défini pour lire une transmittance à 100% ou une absorbance 0 (selon l'instrument).
* Cela définit la ligne de base pour toutes les mesures ultérieures.
* Importance: Cette étape d'étalonnage corrige toute absorbance ou transmittance causée par le solvant ou d'autres composants de l'échantillon qui ne sont pas l'analyte d'intérêt.
3. Étalonnage spécifique à l'instrument:
* Normes d'étalonnage: Certains spectrophotomètres nécessitent des normes d'étalonnage spécifiques (par exemple, des solutions avec des concentrations connues d'analytes spécifiques).
* Procédure:
* Mesurez l'absorbance ou la transmittance des normes à l'aide du spectrophotomètre.
* Entrez ces mesures dans le logiciel de l'instrument.
* L'instrument créera ensuite une courbe d'étalonnage, qui relie l'absorbance ou la transmittance à la concentration.
* Importance: Permet à l'instrument de convertir directement les lectures d'absorbance ou de transmittance en mesures de concentration pour des analytes spécifiques.
Conseils supplémentaires:
* Calibration régulière: L'étalonnage fréquent (quotidien ou hebdomadaire) est essentiel pour maintenir la précision.
* Maintenance appropriée: Garder l'instrument propre et exempt de poussière, d'empreintes digitales et de rayures est vital pour des performances optimales.
* en utilisant des normes et des réactifs de haute qualité: La précision de l'étalonnage dépend de la qualité des normes et des réactifs utilisés.
* Contrôle de la température: Certains spectrophotomètres nécessitent un environnement de température stable pour des mesures précises.
Remarque: Les procédures d'étalonnage spécifiques et la fréquence peuvent varier en fonction du modèle de spectrophotomètre et de son utilisation prévue. Consultez toujours le manuel de l'instrument pour des instructions détaillées.
