Le calcul des titres de virus est une façon compliquée de dire qu'un scientifique compte le nombre de virus dans un échantillon particulier. Pour calculer les titres viraux, les scientifiques infectent les plaques de bactéries en croissance avec des solutions virales à des concentrations variables et déterminent le nombre de virus dans la solution originale en comptant les bactéries qui sont mortes en raison de l'infection virale. br>

Mettez des gants, remplissez 10 tubes de culture avec 9 ml de bouillon et étiquetez-les "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", et ainsi de suite jusqu'à "10 ^ - 10. "Ces tubes seront utilisés pour des dilutions sérielles virales. Puisque les virus peuvent atteindre des concentrations incroyablement élevées, vous devez les diluer pour les compter efficacement. Chaque tube représente une dilution au dixième du virus.

Prélever 1 ml de la culture de virus que l'on veut titrer et la transférer dans le tube intitulé "10 ^ -1" à l'aide d'une pipette. Bien mélanger le tube. Ceci est votre première dilution au dixième.

Prenez 1 ml de la culture mélangée de votre tube étiqueté "10 ^ -1" et transférez-le avec une nouvelle pipette dans le tube suivant, étiqueté "10 ^ -2" Mélangez également ce tube.

Continuez ce modèle pour créer une série de dilution en série. Vous allez vous retrouver avec 9 tubes de 9 ml et 1 tube de 10 ml. Les charges virales dans vos tubes seront diluées de 10 fois (votre premier tube) ou 100 fois (votre deuxième tube) à dix milliards de fois (votre tube final).

Préparer les plaques

Prenez 10 tubes d'agar tryptone et 10 boîtes de Pétri et étiquetez-les pour correspondre à vos tubes de dilution en série.

Desserrez les bouchons afin qu'ils ne se détachent pas dans la chaleur, puis placez vos tubes d'agar dans un bécher d'eau bouillante. Cela va faire fondre l'agar afin que vous puissiez le verser dans des boîtes de Pétri.

Transférer vos tubes dans un bain d'eau chaude réglé à 45 degrés Celsius minimum. Cela garantira que votre gélose ne se solidifie pas dans les tubes avant que vous ayez une chance de le verser dans une boîte de Pétri.

Ajoutez deux gouttes de culture bactérienne à votre gélose et mélangez-la doucement. Ce sont les bactéries qui seront tuées, ce qui vous permettra de compter le nombre de particules virales dans une solution particulière.

Ajoutez 1 ml de chaque dilution en série à son tube d'agar correspondant pendant que les tubes sont encore dans l'eau chaude une baignoire. Par exemple, 1 ml de votre dilution en série 10 ^ -1 devrait aller dans le tube d'agar étiqueté "10 ^ -1".

Mélanger chaque tube et ensuite verser chaque tube dans la boîte de Pétri avec l'étiquette correspondante. Cela va créer une fine couche d'agar qui a été inoculé avec des bactéries et des virus dans chaque plaque. Laissez les plaques se développer pendant la nuit dans un incubateur.

Compter et calculer les Titres

Sortez vos assiettes de l'incubateur et examinez-les. Vous devriez voir des zones nuageuses à travers la plaque où les bactéries ont grandi, sauf pour les petites taches claires appelées plaques. Ces plaques sont des plaques de bactéries mortes, et chaque plaque représente un virus.

Trouvez une plaque qui a entre 30 et 300 plaques et comptez le nombre exact de plaques sur cette plaque.

Prenez la Si vous avez compté 157 plaques, vous obtiendrez 1570.

Multipliez le nombre que vous avez obtenu à l'étape précédente par l'inverse du nombre sur votre tube de dilution. Par exemple, si la plaque que vous avez sélectionnée est la plaque 10 ^ -5, vous devez multiplier 1570 par 10 ^ 5 pour obtenir 157000000. Ce nombre final est le titre de votre virus, et représente le nombre de virus par ml de votre culture originale. br>

Avertissement

Soyez prudent lorsque vous travaillez avec des virus. Tous les virus ne sont pas dangereux, mais vous devriez prendre des précautions. Changez vos gants souvent. Essuyez tout déversement immédiatement et désinfectez la zone.