La chromatographie liquide à haute performance est une technique pour l'analyse en laboratoire d'un mélange. C'est un type efficace de chromatographie qui utilise la haute pression, plutôt que simplement la gravité, pour propulser un échantillon d'un mélange à travers une colonne. Un échantillon est injecté, puis une pompe contenant de grandes quantités de pression aide à déplacer l'échantillon le long d'une colonne garnie, où il est séparé en composants individuels. Cette séparation est ensuite analysée par un détecteur pour donner des résultats.

Site d'injection

Pour être injecté dans une HPLC, un échantillon doit d'abord être dissous dans un solvant liquide polaire, de préférence un avec Les spectres HPLC connus permettent de distinguer ses données de celles de l'échantillon. La solution liquide contenant l'échantillon est placée dans l'instrument et envoyée dans la colonne. L'emplacement réel du site d'injection dépend de la marque des instruments. Dans la plupart des cas, le processus d'injection est automatisé, mais dans certains cas, un laboratoire doit injecter l'échantillon à l'aide d'une petite aiguille de seringue.

Composant de pompe

Le composant de pompe de l'unité HPLC est nécessaire parce qu'il fournit la pression qui propulse l'échantillon à travers la colonne. La force de la pompe varie, mais une pompe puissante peut produire une pression allant jusqu'à 6 000 psi, ou livres par pouce carré, qui est appliquée après l'injection de l'échantillon. Cela permet à l'échantillon de traverser la colonne plus rapidement et plus efficacement que si elle s'écoulait en utilisant uniquement la force de gravité.

Description de la colonne

La vitesse accrue d'un échantillon traversait la colonne. colonne par une pompe permet l'utilisation d'un type de colonne différent de ceux utilisés en chromatographie liquide simple. Le matériau d'emballage dans la colonne peut avoir une taille de particule beaucoup plus petite, ce qui augmente la surface spécifique et facilite donc les interactions de l'échantillon avec la colonne. La plupart des colonnes HPLC fonctionnent par polarité. L'échantillon est dissous dans un solvant polaire et la colonne est composée d'hydrocarbures en grande partie non polaires. Les parties polaires de la molécule d'échantillon traversent la colonne très rapidement car elles interagissent principalement avec le solvant, tandis que les composants non polaires de l'échantillon persistent dans la colonne, formant de faibles interactions avec les composants de la colonne. Par conséquent, les composants de l'échantillon sortent de la colonne du plus polaire au plus non polaire.

Fonction du détecteur

Les détecteurs varient également en fonction du type d'instrument HPLC utilisé. Cependant, la plupart fonctionnent de la même manière basique. Une source de lumière ultraviolette brille sur les composants de l'échantillon séparés lorsqu'ils quittent la colonne. La plupart des composés organiques absorbent une certaine quantité de lumière, de sorte qu'ils passent par le faisceau lumineux appliqué, un détecteur peut capter la quantité de lumière absorbée. Le détecteur enregistre également le temps de rétention des composants en fonction de l'ordre dans lequel ils sortent de la colonne. Cette sortie peut ensuite être analysée en fonction de la zone de pic pour déterminer la nature exacte des composants de l'échantillon.