L'électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire couramment utilisée avec de nombreuses applications pratiques, notamment les empreintes génétiques d'ADN et le séquençage du génome. Le processus consiste à séparer les fragments d'ADN à l'aide d'un courant électrique tout en suivant la vitesse du mouvement moléculaire à travers un gel filtrant.
L'ajout de colorant de suivi bleu ou orange aux échantillons d'ADN incolores vous permet de voir votre échantillon et d'obtenir des informations sur la façon dont l'ADN les molécules se déplacent pendant l'électrophorèse. L'identification est basée sur la taille des bandes d'ADN sur le gel après la migration des molécules.
Comment fonctionne l'électrophorèse sur gel
L'électrophorèse sur gel tire les fragments d'ADN à travers un gel en utilisant un courant électrique pour isoler et identifier les molécules d'ADN par taille et la charge électrique. Le gel est souvent composé de poudre d'agarose L'agarose est ajouté à une solution tampon d'eau et de sel, et le mélange est chauffé et refroidi pour en faire un matériau poreux gel qui agira comme une matrice filtrante pendant la procédure d'électrophorèse. Le gel est ensuite placé dans une unité d'électrophorèse et recouvert d'une solution tampon conductrice d'électricité. Les solutions contenant de l'ADN et des colorants de chargement sont pipetées dans de petits puits dans le gel qui doivent être fabriqués pendant la préparation du gel. Colorants A l'électrode positive est située à l'extrémité opposée. Un standard connu de fragments d'ADN est placé dans le premier puits qui créera une échelle de bandes d'ADN à des fins de comparaison et d'identification. Le squelette phosphate des molécules d'ADN donne à l'ADN une charge négative. Les opposés s'attirent donc, par conséquent, les molécules d'ADN sont attirées vers l'électrode positive et commencent à se déplacer ou à «migrer» lorsqu'un courant électrique est activé. Les fragments d'ADN de plus petite taille voyagent plus rapidement que les fragments plus gros car ils rencontrent moins de résistance lors de leur migration à travers la matrice poreuse du gel. Des fragments d'ADN de taille similaire forment des bandes d'ADN dans le gel. L'ADN est incolore, donc l'ajout de colorants de suivi Le colorant choisi ne doit pas être réactif ni altérer l'ADN. Le bleu de bromophénol est un colorant utilisé pour suivre les brins d'ADN de plus petite taille contenant environ 400 paires de bases, tandis que le xylène cyanol est meilleur pour les brins d'ADN plus grands avec jusqu'à 8 000 paires de bases. Le colorant choisi ne doit pas être réactif ni altérer l'ADN. Lors de la préparation de votre échantillon d'ADN pour l'électrophorèse, vous devrez ajouter du glycérol et de l'eau en même temps que le chargement des colorants. Le glycérol est une substance lourde et sirupeuse qui donne plus de densité à l'échantillon d'ADN avant qu'il ne soit inséré dans les puits à une extrémité de la feuille de gel. Sans glycérol, l'échantillon d'ADN se disperserait au lieu de couler et de former un couche dans le puits comme il est censé le faire pour former une échelle d'ADN. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécyl sulfate de sodium (PAGE SDS) est une technique appropriée pour séparer les protéines et les acides aminés , qui sont plus petites et plus complexes que les molécules d'ADN linéaires. Le polyacrylamide (gel SDS PAGE) est utilisé à la place du gel d'agarose pour l'électrophorèse. Le bleu de bromophénol (BPB) est ajouté au tampon d'échantillon en tant que colorant de suivi Le colorant de liaison à l'ADN tel que de couleur orange Il faut être très prudent lors de la manipulation de ce colorant mutagène car il peut se lier à l'ADN des cellules de la peau. Contrairement au colorant de repérage, le bromure d'éthidium est fluorescent
- un polysaccharide extrait des algues.
vous aident
à voir clairement l'échantillon
que vous ajoutez aux puits de gel situés près de l'électrode négative de l'unité d'électrophorèse.
Chargement de l'objectif et de l'importance du colorant
à un échantillon vous aide à déterminer la vitesse de déplacement
de molécules de protéines de différentes tailles dans le gel pendant l'électrophorèse. Le bleu de bromophénol et le xylène cyanol sont des exemples de colorants de charge qui se déplacent avec l'échantillon d'ADN.
Rôle du glycérol dans l'électrophorèse sur gel d'agarose
Tracking Dye dans SDS PAGE
qui se déplace dans le même sens de séparation protéines et délimite leur bord d'attaque.
Rôle du colorant de liaison à l'ADN
du bromure d'éthidium peut être ajouté au gel ou au tampon d'électrophorèse. Comme son nom l'indique, le colorant s'attache à la molécule d'ADN.
sous une lumière ultraviolette, rendant les bandes d'ADN visibles.
