Tris, ou tris (hydroxyméthyl) aminométhane, est un tampon biologique commun, utilisé tout au long du processus d'extraction de l'ADN. Pendant l'extraction de n'importe quel nombre de sources, l'ADN est sensible au pH. Pendant la lyse cellulaire, l'élimination des composants cellulaires indésirables et la précipitation, tris est utilisé pour maintenir un pH stable. De plus, il joue un rôle particulièrement important dans la lyse cellulaire.

TL: DR (Trop long: pas lu)

L'extraction de l'ADN est un processus sensible au pH, et l'utilisation d'un tampon tris aide à maintenir le pH stable par rapport à la lyse et à l'extraction des cellules.

Tris en tant que tampon

Comme le pH peut influencer et être influencé par un certain nombre de facteurs cellulaires, le maintien d'un pH stable est essentiel à la science expérimentale . Les tampons biologiques, comme les tris, sont importants car ils peuvent maintenir un pH stable malgré les influences qui pourraient autrement modifier le pH. Tris (hydroxyméthyl) aminométhane, avec un pKa de 8,1, est un tampon efficace entre pH 7 et 9. En raison de sa gamme neutre, tris est un tampon couramment utilisé dans les laboratoires biologiques. Cependant, le tampon tris est sensible à la température et doit être utilisé à la température à laquelle il a été initialement fixé pour éviter toute imprécision.

La lyse des cellules

La lyse, ou l'ouverture des cellules, est la première étape d'extraction de l'ADN. Ceci est accompli par un tampon contenant du tris et de l'EDTA (acide éthylène diamine tétracétique). L'EDTA lie les cations divalents tels que le calcium et le magnésium. Puisque ces ions aident à maintenir l'intégrité de la membrane cellulaire, les éliminer avec de l'EDTA déstabilise la membrane. Tris est le composant tampon principal; son rôle principal est de maintenir le pH du tampon à un point stable, habituellement 8,0. De plus, tris interagit probablement avec le LPS (lipopolysaccharide) dans la membrane, servant à déstabiliser davantage la membrane.

Tris protège l'ADN des changements de pH

Quand les cellules sont brisées, leur ADN et le contenu se répand dans le tampon. De plus, la RNase A (détruit l'ARN), les protéases (détruit les protéines) et le SDS (dodécylsulfate de sodium, solubilise les fragments membranaires) sont souvent inclus. Pris ensemble, cette soupe de contenu cellulaire et d'ARN fragmenté et de protéines peuvent avoir un grand impact sur le pH de la solution. Parce que l'ADN est sensible au pH, il est important que Tris tamponne la soupe et maintienne le pH à un point stable.

Précipitation de l'ADN

Au stade final de l'extraction de l'ADN, l'ADN est lui-même extrait de la solution. À ce stade, l'ADN est soluble dans le tampon. Pour extraire de la solution, l'ADN est rendu insoluble en ajoutant de l'éthanol ou de l'isopropanol (alcool isopropylique). Lorsque cela est fait, l'ADN devient évident dans la solution comme une substance blanche thready. Bien que l'ADN puisse être isolé des composants cellulaires restants de cette manière, il n'est pas "utilisable" lorsqu'il est insoluble. Après l'isolement, l'alcool est éliminé, et l'ADN doit être retourné à un tampon biologique, comme le tris, à utiliser.

Faites-le vous-même

Bien que l'extraction de l'ADN soit couramment effectuée dans les laboratoires de recherche généralement en utilisant l'un des nombreux kits disponibles dans le commerce, n'importe qui peut faire l'extraction de l'ADN à la maison en utilisant des articles ménagers courants et des pois verts ou des épinards. Dans ce cas, tris, ni aucun tampon biologique, n'est présent pour protéger l'ADN des changements de pH. Cependant, c'est un moyen visuel d'aider les étudiants à se connecter avec l'ADN cellulaire.