Escherichia coli, E. coli, est une bactérie qui se développe dans les intestins inférieurs des mammifères. Cette bactérie a été découverte pour la première fois à la fin des années 1800. Depuis lors, il a une longue histoire d'utilisation dans la recherche scientifique. C'est l'organisme le plus largement utilisé en génétique moléculaire. Une partie de la raison pour laquelle E. coli est couramment utilisé dans la recherche scientifique est qu'il est facile à cultiver en laboratoire. Les facteurs qui rendent E. coli facile à cultiver sont ses besoins nutritionnels simples, son taux de croissance rapide et ses besoins d'entretien modérés.
Stérilisez la boucle d'inoculation en la plaçant dans la flamme du brûleur Bunsen. Passez la moitié inférieure de la boucle à travers la flamme jusqu'à ce qu'elle devienne rouge.
Laissez la boucle refroidir. Vous pouvez le toucher à la gélose stérile sur la plaque pour vous assurer qu'elle a refroidi. Ne placez pas la boucle sur la table et ne la laissez pas entrer en contact avec autre chose que de la gélose stérile ou la culture souhaitée maintenant qu'elle a été stérilisée.
Plongez la boucle dans la culture d'E. Coli puis retirez-la.
Ouvrez la plaque d'agar et faites glisser doucement la boucle d'avant en arrière sur la surface d'une section de l'agar. Prenez soin de ne pas rayer la gélose avec la boucle. La gélose fournit les nutriments dont E. coli a besoin pour se développer.
Placer à nouveau la boucle dans la flamme du brûleur Bunsen pour la stériliser. Une fois que la tige de boucle a refroidi, touchez-la à une section stérile de la plaque pour vous assurer qu'elle est froide, puis faites glisser la boucle dans votre première séquence pour faire une deuxième séquence. Cette deuxième séquence est une version diluée de la première séquence. Répétez ce processus de stérilisation et de glissement jusqu'à ce que plusieurs sections de la plaque de gélose aient été glissées. La raison pour laquelle vous faites cela est que vous puissiez ensuite choisir parmi des colonies clonales uniques. Cela vous aidera à vous assurer d'avoir au moins une section qui a des colonies individuelles - pas trop concentrée (qui aura trop de croissance et ne vous permettra pas de choisir dans une seule colonie) et pas trop diluée (ce qui ne donnerait pas de colonies)
Stérilisez la boucle dans la flamme une dernière fois avant de la mettre de côté dans la zone de travail.
Remettez le dessus sur la plaque d'agar. Retournez la plaque à l'envers et placez-la dans l'incubateur réglé à 37 degrés Celsius (98,6 degrés Fahrenheit). Cette température d'incubation idéale simule la température du corps humain où réside E. coli. Dans les 24 à 48 heures, des colonies visibles de bactéries E. coli apparaîtront dans la plaque d'agar.
Avertissements
Confinement correct des échantillons d'E. Coli et la stérilisation de la boucle d'inoculation réduira les risques de propagation des bactéries. Aucune nourriture ou boisson ne doit être consommée dans la zone d'expérimentation. Le port de gants réduira davantage le risque de contamination des mains.
